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ELISA实验攻略:样本的收集与整理
ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种广泛应用于生物学和医学研究的免疫分析方法，其样本收集与处理的质量直接影响实验结果的准确性。以下是三类常见ELISA样本的详细收集与处理方法。
一、血清样本处理
血清是ELISA实验最常用的样本类型，其处理方法相对简单但需要严格操作：
1.采集方法：
使用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液样本;
推荐使用干燥管(黄色)或促凝管(红色)收集全血。
2.凝固处理：
将试管室温放置自然凝固(视环境温度10分钟到2小时不等)；
或4℃过夜使血清充分析出；
建议倾斜试管以扩大液面横截面，促进血清分离。
3.离心分离：
2-8℃条件下以5000-6000转/分钟离心5分钟左右；
也可采用2500-3500rpm离心5-10分钟；
仔细收集上清液，避免吸取中间层细胞成分。
4.保存注意事项：
采集过程应避免溶血；
立即检测或分装保存于-20℃/-80℃；
避免反复冻融，保存期限通常为1-6个月。
二、血浆样本处理
血浆样本需要抗凝处理，与血清处理方法有所不同：
1.采集准备：
使用含抗凝剂(如EDTA、肝素或柠檬酸钠)的采血管；
推荐使用2.0%EDTA作为抗凝剂。
2.采集与初步处理：
采集后立即轻柔颠倒混匀5-10次；
确保抗凝剂与血液充分混合。
3.离心分离：
4℃条件下700-1000×g离心10分钟；
取上层淡黄色透明液体为血浆；
严格避免吸取中间白色干扰层(含白细胞和血小板)。
4.保存与注意事项：
可立即检测或置于冰上短期保存；
长期保存建议-80℃，可储存约1个月；
样本应避免溶血或高血脂；
如有沉淀形成，使用前需再次离心。
三、细胞培养上清液处理
细胞培养上清液常用于检测细胞分泌的可溶性因子：
1.收集方法：
用无菌管收集细胞培养上清液；
贴壁细胞需先用冷的PBS轻轻清洗；
悬浮细胞可直接离心收集。
2.离心处理：
1000×g离心20分钟去除细胞碎片；
也可采用2000-3000转/分离心20分钟。
3.保存要求：
将上清液分装保存于-20℃/-80℃；
避免反复冻融；
检测前如有沉淀需再次离心。
四、通用注意事项
1.样本质量要求：
所有样本应澄清透明，无沉淀或悬浮物；
避免使用含NaN3的样本(会抑制HRP活性导致假阴性)；
组织样本应按重量(g):体积(mL)=1:9比例加入匀浆介质处理。
2.保存与运输：
-20℃保存样本建议1-6个月内检测；
4℃保存样本应在一周内完成检测；
运输需使用耐低温、密封性好的材料；
监控运输温度，必要时选择专业温控物流。
3.检测前处理：
所有样本检测前应再次检查澄清度；
如有沉淀或悬浮物需重新离心；
根据实验需求进行适当稀释。
正确的样本收集与处理是ELISA实验成功的关键第一步，遵循上述规范可显著提高实验结果的可靠性和重复性。不同样本类型可能需要特定的处理方式，建议根据具体实验目的和检测指标选择最合适的处理方法。
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