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生化试剂盒

葡萄糖含量试剂盒-可见分光光度法

测定原理

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢;过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在505 nm有特征吸收峰。

中文名称 葡萄糖含量试剂盒
规格 48样
货号

E-318-SH

价格 ¥700
样本类型 血清,血浆,组织匀浆,细胞裂解液、细胞培养上清液等
检测范围 详见说明书
检测方法 可见分光光度法
货期 3-5天
说明书 咨询我司业务员获取
文献 咨询我司业务员获取


    正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物,而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用产生葡萄糖。就哺乳动物而言,葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组织等的唯一能源,而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。


测定原理

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢;过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在505 nm有特征吸收峰。


自备的仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵和蒸馏水


试剂的组成和配制:

试剂一:0.5μmol/mL葡萄糖溶液10mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体 25ml×1瓶,4℃保存;

试剂三:液体 25ml×1瓶,4℃保存;(若出现结冰现象,可37℃水浴溶解后使用)


葡萄糖提取

1、组织的处理:按照组织质量(g:蒸馏水体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL蒸馏水),研磨成匀浆,95℃水浴10分钟(盖紧,防止水分散失),冷却后,8000g25离心10min,取上清液备用。

2、细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清按照细菌或细胞数量(104个):蒸馏水体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL蒸馏水),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3S,间隔10S,重复30次),95℃水浴10分钟(盖紧,防止水分散失),冷却后,8000g25离心10min,取上清液备用。


测定步骤

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至505nm,蒸馏水调零。

2混合试剂的配制:使用前将试剂二和试剂三1:1等体积混合,用多少配多少。

3、加样表在EP中加入下列试剂

试剂(μL

空白管

标准管

测定管

样本

 

 

100

试剂一

 

100

 

蒸馏水

100

 

 

混合试剂

900

900

900

 

混匀,置37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴中,保温15min505nm波长处读取吸光度。空白管、标准管和测定管吸光值分别记为A1A2A3。空白管和标准管只要做一管。



葡萄糖含量计算:

1、按样本蛋白浓度计算

葡萄糖含量(µmol/mg prot)=(C标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)=0.5×(A3-A1)÷

(A2-A1)÷Cpr

2、按样本鲜重计算

葡萄糖含量(µmol/g 鲜重)= (C标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=0.5×(A3-A1)÷

(A2-A1)÷W

3、按细菌或细胞密度计算

葡萄糖含量(µmol/ 104 cell)= (C标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)=0.001×(A3-A1)÷

(A2-A1)

C标准:标准管浓度,0.5µmol/mLV1:加入样本体积,0.1mLV2:加入提取液体积,1mL Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本鲜重,g500:细菌或细胞总数,500万。

 

注意:

1最低检测限为50nmol/g鲜重或0.5nmol/mg prot

2若样本中存在葡萄糖氧化酶抑制剂,则会造成测定结果偏低,建议改用HPLC法测定。

 


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