人ELISA试剂盒

- 人乙肝病毒 检测试剂盒
- 上海恒远生物从事酶联免疫学10年有余,技术成熟,产品稳定。恒远品牌自主研发ELISA试剂盒,现已涵盖20多个种属,数千种产品,涉及肿瘤、激素、自身免疫、心血管、代谢等十多个研究领域。其ELISA试剂盒不仅检测指标丰富,还可以根据实验需求定制检测范围,并且提供实验外包与免费代测服务。欢迎您来电咨询。
人乙肝病毒 检测试剂盒(酶联免疫法)
价格: 2000
货号:HY3764X-Hu
检测原理:
试剂盒采用双抗体夹心法原理:将人乙肝病毒捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及对照品中待测物,加入辣根过氧化物酶标记的酶标记检测抗体,结合形成“抗体-抗原-抗体-HRP”免疫复合物,检测过程中游离的成分均被洗去。加入TMB显色液,在过氧化物酶(HRP)的催化作用下,若反应孔中有待测物则显蓝色,加入终止液,在酸的作用下变成黄色。用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样本中的人乙肝病毒呈正比,通过公式判定样本阴阳性。
试剂盒组分:
|
名 称 Label |
组成成分 Kit Components |
数量(48T) Quantity |
数量(96T) Quantity |
|
酶标板 |
预包被酶标板 |
8×6条 |
8×12条 |
|
阳性对照 |
阳性对照 |
0.5mL |
1mL |
|
阴性对照 |
阴性对照 |
0.5mL |
1mL |
|
酶标记物 |
HRP标记检测抗体 |
6mL |
12mL |
|
样品稀释液 |
PBS、BSA等 |
10mL |
15mL |
|
浓缩洗液(20×) |
20倍浓缩洗液 |
15mL |
2×15mL |
|
显色剂 |
TMB、过氧化氢 |
6mL |
12mL |
|
终止液 |
稀硫酸、抗沉淀剂 |
3mL |
6mL |
说明:相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些,请在使用时量取而非直接倒出。
试剂准备及储存:
· 试剂盒各组分应储存于2~8℃保存;
· 使用前请确保试剂盒按规定的条件储存,每次实验仅准备所需实验用量的试剂;
· 1×洗液的配制:浓缩洗液(20×)如有晶体析出,需在37℃下加热至晶体全部溶解后使用。用蒸馏水1:20稀释,例如:10mL浓缩洗涤液加入190mL的蒸馏水,混合均匀。配制好的洗液可以在室温保存1周。
7.检测程序:
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右,也可置于37℃温箱快速回温至室温。
注意:酶标板未恢复室温前,请勿开封。
|
1 |
编号 |
合理安排阳性对照孔、阴性对照孔、空白孔、样品孔。 |
|
2 |
稀释 加样 |
阳性对照孔加入阳性对照100uL,阴性对照孔加入阴性对照100uL。阴阳对照各设置2孔。 样本孔先加入样品稀释液100uL,再加入样本10uL。 空白孔不加样品不加酶,其余操作与样品孔相同。 |
|
3 |
温育 |
盖上封板膜,在37℃下孵育30分钟 |
|
4 |
洗板 |
洗板5次,最后一次洗板后倒扣酶标板,在干净的吸水纸上拍去残液。 |
|
5 |
加酶 |
每孔加入酶标记物100μL。空白孔:不加酶标记物。 |
|
6 |
温育 |
盖上封板膜,在37℃下孵育30分钟。 |
|
7 |
洗板 |
洗板5次,最后一次洗板后倒扣酶标板,在干净的吸水纸上拍去残液。 |
|
8 |
显色 |
每孔加入显色剂100uL,37℃避光显色15分钟。 |
|
9 |
终止 |
每孔加终止液 50uL。 |
|
10 |
测定 |
使用酶标仪在450nm检测波长及620-690nm参比波长条件下测定吸光度值,如果没有参比波长则仅选择450nm波长进行检测。 |
8.检测程序总结:
|
步骤 |
试剂 |
体积 |
孵育时间 |
孵育温度 |
洗涤次数 |
|
1 |
加样 |
100ul |
30分钟 |
37℃ |
5次 |
|
2 |
加酶 |
100ul |
30分钟 |
37℃ |
5次 |
|
3 |
加显色液 |
100ul |
15分钟 |
37℃,避光 |
无 |
|
4 |
加终止液 |
50ul |
无 |
无 |
无 |
|
5 |
加入终止液后5分钟内用酶标仪在 450nm 处测吸光值 |
||||
9. 阳性判断值Cut-Off:
Cut-Off =阴性对照孔平均OD值×2.1(阴性对照孔OD均值小于0.050时,按0.050计算)。
例:阴性对照孔平均OD值为0.100,则Cut-OFF值=0.100×2.1=0.210;
阴性对照孔平均OD值为0.020,则Cut-OFF值=0.050×2.1=0.105。
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